产品介绍

Trizol 广泛适用于从各种动物组织、幼嫩植物、培养细胞、细菌、酵母等样品 中分离纯化总 RNA 和 Small RNA。Trizol 可在短时间内裂解细胞和组织样本，并 有效抑制样本中 RNA 的降解，保持 RNA 的完整性。

Trizol 无需添加氯仿，用法简单且全程可在常温进行，提取的总RNA 可直接用于 Northern、点杂交、mRNA 纯化、体外翻译、RT-PCR、poly(A)+选择、RNA 酶保护分析以及构建 cDNA 文库等多种分子生物学实验。

保存方法

2-8℃,  保存两年。

标准抽提步骤

1.   样品匀浆

a) 动物/植物组织：

将组织在研钵中用液氮充分研磨成粉末，取 25-50 mg 粉末，加入 500 μlTrizol， 盖好管盖，用力振荡混合均匀。

b) 单层培养细胞：

弃去培养基，向直径 3.5 cm 的培养板/瓶中加入 500 μlTrizol（按培养板面积而 不是细胞数决定加入量，每 10 cm2 加入 500 μl），用移液器轻轻反复吸打裂解 细胞至溶液透明，吸取匀浆液到一个 1.5 ml 离心管中。

c) 细胞悬液：

离心收集细胞，弃尽上清，每 1-5 x 106 个细胞加入 500 μl Trizol，用移液器反 复吸打直至充分裂解。

注意：加入 Trizol 前不要洗涤细胞，以免降解 mRNA 。一些酵母和细菌可能 需要匀浆仪或液氮研磨破壁处理。

2. 向匀浆液中加入 2/5 体积的 RNase-free H2O（每500  μl  Trizol 加入200 μl RNase-free H2O），盖好管盖，用力振荡 15 s 混匀，室温孵育 5 min。

3. 室温 12,000 rpm 离心 15 min。此时溶液分成上层水相（含 RNA）和深色的 下层沉淀（含蛋白质、DNA、多糖等杂质），小心吸取上层水相至一个新的离心管中。

注意：1）上层水相体积约占总体积的 90%，如用 500 μl Trizol 提取，上层水 相约为 640 μl，建议吸取 500 μl 进行后续操作；针对微量的样本进行提取时， 为减少 RNA 损失，可以全部转移上清。2）当样本量较小时，离心后可能不 会出现下层沉淀，属于正常现象，可继续按后续步骤完成提取。

4.   加入等体积异丙醇，上下颠倒充分混匀，室温静置 10 min。

5. 室温 12,000 rpm 离心 10 min，通常可见白色 RNA 沉淀，小心弃去上清。

注意：RNA 沉淀在离心前通常不可见，离心后在管侧壁和管底形成薄片状沉 淀（样品量少的情况下，RNA 沉淀散在管侧壁和管底有可能看不到明显沉淀）。

部分组织材料由于含有较多的代谢产物，导致沉淀不能聚集而分散在离心管壁上，此时，请沿液面缓慢吸弃上清。

6.   加入 1 ml 75%乙醇（用RNase-free H2O 配制）漂洗沉淀，涡旋振荡5s 让沉淀悬浮起来，并上下颠倒数次。

7. 室温 12,000 rpm 离心 3 min，小心弃去上清。

8.   重复步骤 6 和 7 一遍。

注意：弃去大部分上清后，建议短暂离心将残留液体甩至管底，用 200 μl 吸 头吸尽残留的乙醇，保留管底及侧壁的白色 RNA 沉淀。

9.   打开离心管盖，室温放置晾干（晾干 1 min 左右即可，不要晾的过干，RNA完全干燥后很难溶解）。根据实验需要，加入 30-100 μl RNase-free H2O，涡旋 3 min（或使用移液器反复吸打管底和管壁的沉淀帮助溶解），得到的 RNA溶液保存在-70℃,防止降解。

注意：从某些样本提取 RNA 时，RNA 沉淀并非完全聚集在离心管管底，而 是以均匀的薄雾状沉淀吸附在管侧壁上。请注意仔细观察，并用移液器吹打管 底和沉淀所在的管侧壁充分溶解所有的 RNA。

注意事项

1.   自备异丙醇、75%乙醇（用 RNase-free H2O 配制）、RNase-free H2O。

2.   所有离心步骤均在室温下进行。

3.   本产品中含有苯酚，具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会引起中毒、灼伤及其他身体伤害，使用时应穿戴防护物，如防护服装、 手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛时，应立即用大量的水冲洗 并前往医院治疗。