本试剂盒为qPCR 反转录专用。试剂盒中包含优化的4xgDNA去除及5x反转录预混液。其中的4xgDNA Remove Mix 能有效清除RNA 样本中残留的gDNA,从而保证后续qRT-PCR 实验的定量结果更加准确可靠。而优化后的5xHP qRT Master Mix 合成能力强、灵敏度高,广泛适用于动植物及微生物 RNA 的逆转录反应,产物兼容染料法和探针法qPCR.
*1.含 Buffer、dNTP、RT 酶、RNase inhibitor、Random primers/0ligo(dT)20 VN primer mix 。
*2.除不含 RT 酶外,其余成分与5xHP qRT Master Mix 相同,用于配制 No RT 阴性对照.
操作流程:
*1.基因表达量低时可增加 RA 用量,但不建议超过5 μg用量。
2.用移液器吹打混匀。42℃孵育2min.
3.配制逆转录反应体系
在第一步的反应液中直接加入4μ1的5XHP qRT Master Mix,移液枪轻柔地吹打混匀。
*2.将5XHP qRT Master Mix替换为 NRT 预混液可逆转录阴性对照反应,用于检验 RNA 模板中是否有基因组 DNA残留。(可选步骤)
*1:对于富含复杂结构和高 GC 的模板,可将温度调整至50℃,有助于提高反转录效率。
保存条件
-30~-15℃保存,干冰/-20℃运输。
注意事项
本制品每次使用时务必使用桌面离心机点离后用移液枪轻柔地吹打混匀,避免剧烈震荡,以免酶失活.
√反应体系需要在冰上配制,配制好的反应液需轻柔混匀离心后再放置于PCR 仪中反应.
V本产品获得的cDNA 仅适用于qPCR 反应,不适用于长片段基因扩增,如有需要,可选用本公司其他相关产品。
√ 高质量的RNA对于获得高质量的cDNA 至关重要,实验前请用电泳验证RNA的完整性。
√反转录过程中使用的相关耗材需确保无酶无菌